空斑形成单位（PFU）是针对具备空斑形成能力的病毒设计的计量单位，通过感染单层宿主细胞后产生的肉眼可见空斑进行计数。该方法的原理是将有限数量的病毒接种于已形成单层结构的宿主细胞中，经培养后通过计算形成的空斑数量来定量病毒浓度。相较于TCID50法等传统计量方式，PFU测定法兼具定性与定量功能，且具有更高的精确度。根据2021年公开数据显示，理论测算中1个病毒颗粒可形成1个空斑，但实际应用中通常以0.7PFU≈1TCID50作为换算参考值。

空斑形成单位（PFU）作为病毒定量标准，其核心原理是通过病毒感染宿主细胞后产生的病理效应进行计量。实验时将梯度稀释的病毒悬液接种于已形成单层结构的宿主细胞上，覆盖琼脂层限制病毒扩散，经培养后通过染色显现出圆形透明区域（即空斑）。每个空斑代表一个具有感染活性的病毒颗粒。

实际操作中需满足以下条件：

与TCID50法相比，PFU法在三个方面具有显著差异：1. 定量方式通过直接计数物理空斑进行病毒定量，而TCID50依赖统计学公式推算病毒滴度。2. 实验周期需培养至出现可见空斑，通常需要更长时间（2-7天不等）。3. 适用范围仅适用于能形成明显细胞病变的病毒种类，如脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒等。

PFU法的精确度优势源于其直接计数特性：

虽然PFU法精确度高，但存在以下应用限制：

该计量单位在疫苗研发、抗病毒药物效价测定等领域具有重要应用价值，特别是在需要高精度病毒定量的研究场景中常作为金标准使用。