电转化是通过瞬时高压电场使
细胞膜产生可逆性
电穿孔的物理转染技术。该技术最初应用于
细菌转化,现已拓展至酵母、动植物及人细胞,转化物质从
DNA扩展到
蛋白质、
病毒等。其原理是利用电脉冲在细胞膜形成直径约10 nm的微孔,使外源物质以
电泳方式进入细胞,孔隙在数分钟内自行修复。操作流程包括
感受态细胞制备、
质粒纯化、电击参数设置及复苏培养等标准化步骤,关键参数需根据细胞类型调整以平衡效率与活性。在
基因治疗、胚胎发育研究和核酸疫苗递送等领域具有重要应用价值。
电转化通过施加500-4000V/cm的电场强度,使细胞膜磷脂双分子层极化形成瞬时可逆孔隙。孔隙直径约10nm,允许直径小于此值的DNA、
RNA或蛋白质通过电渗作用进入细胞。该过程物理特性主导,不受细胞表面分子特性显著影响,孔隙在停止电击后通过膜流动性自行闭合。
感受态细胞制备:以
大肠杆菌为例,需在4℃预冷条件下完成菌液离心洗涤,用10%
甘油重悬菌体至浓度为3×10^10 CFU/mL。植物细胞则需先制备去壁的
原生质体。
基因治疗:不可逆电穿孔技术用于肿瘤细胞非热消融治疗,通过调整脉冲参数实现选择性杀伤。2012年鸡胚实验证实,改良电穿孔法可将外源基因表达时间从2-3天延长至16天以上。
疫苗研发:通过优化电转参数,可将
mRNA疫苗直接导入
树突状细胞,抗原呈递效率提升40%。日本BEX公司CUY21EDITII型设备在此领域取得产业化应用。