琼脂稀释法是微生物学领域用于纯种分离和抗菌药物敏感性试验的常规方法，通过梯度稀释样本或药物与琼脂培养基混合，获得单一菌落或测定最低抑菌浓度（MIC）。该方法兼具纯培养分离与定量药敏检测功能，被CLSI列为标准方法。操作时需将待测样本或抗菌药物进行系列稀释（如1:10至1:10000梯度），与45-50℃琼脂混合后倾注平板，接种0.5麦氏浊度菌悬液，经35℃培养后观察生长抑制情况。核心步骤包括梯度稀释配制、培养基温度控制、标准化接种及结果判读。质量控制需使用大肠埃希菌ATCC25922等标准菌株，并遵循CLSI规定的培养基成分、药物浓度换算及培养条件。该方法广泛应用于肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等病原菌的药敏检测，与Etest法检测结果具有高度一致性。其标准流程涵盖需氧菌、厌氧菌及真菌等多类微生物的敏感性测试。