点杂交是一种基于分子探针特异性结合的核酸检测技术，其核心流程是将变性的DNA或RNA样本固定于尼龙膜等固相基质，通过与标记探针的碱基互补配对实现靶序列识别。该技术包含反向点杂交、斑点杂交等分支方法，广泛应用于病原体检测（如HPV分型、沙门菌鉴定）和遗传性疾病诊断（如β-地中海贫血基因突变筛查）。

点杂交基于核酸互补配对原理，通过将变性的DNA或RNA样本直接点样固定于尼龙膜，加入过量标记探针进行杂交反应。反向点杂交法作为改进技术，将探针预先固定于膜条，实现PCR扩增产物与多探针同步杂交。技术流程包含三个核心环节：

DNA样本需经95℃变性处理并快速冰浴冷却，RNA样本使用变性液（含甲醛）处理维持单链状态。临床检测中常采用通用引物PCR扩增靶序列，并用生物素标记扩增产物。

采用紫外交联或80℃烘烤2小时将探针共价结合至尼龙膜表面。反向点杂交法的探针阵列可包含25种型特异性探针（如HPV分型检测）。

标准杂交条件为42℃预杂交30分钟后加入探针杂交1小时。自动核酸杂交仪可精确控制温度（±0.5℃误差）与振动频率（50Hz），确保杂交效率一致性。

单次杂交可检测多种病原基因型（如25型HPV）或突变位点（如β-珠蛋白基因17个突变位点）。膜条探针在室温条件下可稳定保存8个月。

探针设计需严格匹配靶序列Tm值（误差≤±0.5℃），并通过交叉反应验证（如HPV检测与淋球菌无交叉）。

配套自动核酸杂交仪实现试剂转移（误差≤10%）与杂交过程标准化，避免人工操作差异。

2024年推广的HPV分型检测试剂盒采用反向点杂交法，可鉴别14种高危型HPV病毒，检测限达10^3拷贝/μL。2010年研究证实该方法可准确识别β-地中海贫血CD17M、IVS-Ⅱ-654M等突变类型。

反向点杂交技术用于检测β-珠蛋白基因点突变，可区分纯合突变与杂合携带状态，为遗传咨询提供依据。

2025年研究将PCR-RDB法应用于空肠弯曲菌检测，通过16S rRNA基因探针杂交实现种特异性鉴定，灵敏度达100 CFU/mL。