分离酶是一种蛋白酶，在真核生物有丝分裂后期特异性催化黏连蛋白复合物解聚，促使姐妹染色单体分离。其活性受多级调控：在分裂前期和中期，通过与securin蛋白或SCR蛋白结合保持失活状态；当细胞进入分裂后期时，后期促进复合体（APC/C）通过泛素化降解securin蛋白，APC/C则促使SCR蛋白水解，从而解除对分离酶的抑制。该酶的活化时机直接影响染色体正确分配，功能异常可导致染色体数目异常等遗传缺陷。

分离酶通过切割黏连蛋白复合物的SCC1亚基，破坏染色体臂部区域的黏连结构，导致姐妹染色单体物理分离。黏连蛋白在细胞分裂间期G1阶段合成并通过核孔进入细胞核，形成环绕染色体的环状结构。该酶的作用具有严格时空特异性，仅在染色体完成赤道板排列后活化，确保遗传物质均等分配。

分裂中期之前，分离酶活性被两种抑制因子阻断：

在低温条件下（4℃），分离酶活性显著降低，导致染色体分离延迟。Shugoshin蛋白通过保护着丝粒区域黏连蛋白不受分离酶水解，确保染色体在正确阶段分离。

作为细胞周期调控关键组分，分离酶功能异常将引发严重后果：

研究发现该酶的合成发生在细胞间期，但其活性严格限定于分裂后期。2025年武汉六中月考题分析表明，securin降解后激活分离酶，促使姐妹染色单体分离。