B5培养基是1968年由Gamborg等人为大豆根细胞培养设计的植物组织培养基,其核心特征为含有较低浓度的铵盐成分,可减轻铵对部分培养物的抑制作用。该培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物组成,适用于豆科植物和木本植物的愈伤组织培养及细胞悬浮培养。产品以粉末形式提供,包含多种规格类型,涵盖基础配方及添加蔗糖、维生素等成分的衍生版本。商业化生产确保批次稳定性,保存需控制在2-8℃环境。
设计背景与特征
B5培养基于1968年由Gamborg团队针对大豆根细胞悬浮培养需求开发。其核心设计特点是铵盐浓度显著低于其他培养基(如MS培养基),因高浓度铵离子会抑制部分植物细胞增殖。实验表明,有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物在B5培养基上更适宜。
组成与配制
培养基组分包含五类物质:无机营养物提供氮、磷、钾等常量元素;蔗糖作为主要碳源;硫胺素等维生素促进细胞代谢;2,4-D等生长调节物质控制分化方向;肌醇等有机附加物辅助细胞发育。其中硝酸盐浓度需维持在20-30mM,添加2mM硫酸铵可加速细胞增殖,但超过此浓度将产生抑制效应。
配制时推荐使用浓缩母液法:将各成分按20倍或200倍浓度预混,使用时取1/20至1/200体积稀释后与琼脂混合。商业化产品如Caisson品牌的B5培养基粉末可直接溶解使用,规格涵盖10L至100LT定制包装,货号体系区分基础型(GBP01)、蔗糖增强型(GBP04)及维生素复合型(GBP08)等变体。
保存与实验应用
液态培养基需在2-8℃避光保存,固态培养基经121℃高压灭菌后形成凝胶。典型培养条件为22℃±2℃恒温环境,配合16小时光照/8小时黑暗周期,相对湿度控制在60%±2%。在大豆根细胞悬浮培养中,需额外添加2,4-D作为植物生长调节剂以维持细胞活性。
B5培养基配方